微生物冷冻干燥保藏的原理是微生物细胞在冷冻减压条件下，细胞脱水，生理活动趋于停止，得以长期维持存活状态。

二、技术规程

1. 冷冻干燥管的选择与清洗

采用耐温度骤变，耐压，管壁厚薄一致且为中性玻璃的安培管，内径8mm，长度不小于10mm。清洗安培管，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗3次，蒸馏水冲洗，至pH中性，然后干燥。

2. 保护剂的选择和准备

保护剂用于减少冷冻干燥引起的微生物细胞的损伤。保护剂的选择与配制因所保藏的菌种的不同有所变化，常用的保护剂为脱脂乳。一般采用20%（W/V）的脱脂乳，116℃高温灭菌15-20min，灭菌后于 37℃培养24h，检查是否灭菌彻底，检验无菌后置4℃冰箱中备用。脱脂乳易形成粉末，冷冻干燥或开启安培管时，干燥菌有逸散的可能，不适宜用于毒性较高的病原菌保藏的保护剂。

3.分装

分装菌液应在无菌条件下操作。使用较长的滴管，将菌液滴入安培管或冻存管的底部，每管0.1-0.2ml，分装结束后用脱脂棉堵住安培管管口，不要过紧或过松，分装时间尽量要短，最好在1-2h内分装完毕并放入-80℃冰箱预冻。

4.冷冻干燥

采用冷冻干燥机进行冷冻干燥。当安培管中的冻干物呈现疏松块状或松散片状，显示冻干已完全，取出安培管放在干燥器内。

5.封管及真空检验

将冷冻干燥完全的安培管，在距管口5cm处喷射火焰将安培管拉细，将安培管管口连接到真空泵，在真空条件下，用喷射火焰对准安培管的细颈部加热融封。融封后的安培管用高频电火花真空测定仪检测真空度。

6. 保藏及质量检查

封口完全的冷冻干燥管应低温避光保藏。一般在封口后1，7，30天，随机抽取若干支冷冻干燥管进行各项指标检验。