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规章制度
十六、生命科学共性研究技术平台微生物菌种低温冷冻保藏技术规程

2019年04月25日 作者:编辑:李媛审核:浏览量 :

一、原理

液氮超低温保藏方法是将菌种保藏在-196℃的液态氮中,或保藏在-150℃的气态氮中。原理是微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止,因而得以长期有效的保藏;微生物菌种在-80℃的低温保存,是依据低温条件可以减缓微生物的新陈代谢,以达到长期有效地保藏微生物的目的。

 

二、方法

1.冻存管的准备 使用螺旋口的塑料冻存管,用蒸馏水浸泡,冲洗干净,干燥后在121℃高压灭菌15-20min或160℃烘箱中干热灭菌2h,备用。

2.保护剂的选择 根据微生物的种类选择保护剂,一般采用10%-20%的甘油。

3.菌种的准备 一般采用保藏对数生长期中期或后期的培养物。

4.分装,预冻及保藏 将菌液分装完后,拧紧冻存管螺帽,在管外用非水溶性记号笔标记菌种编号及保藏日期。预冻时控制温度下降速度为每分钟下降1℃,下降到-35℃左右放入液氮罐中保藏,保藏周期可达10年以上。

 

三、注意事项

1.防止操作人被冻伤,注意安全,戴手套及面罩

2.塑料冻存管一定要拧紧螺帽,防止液氮渗入管中,如果液氮渗入管中,取出时液氮体积膨胀会发生爆炸,要特别小心。

3.注意观察液氮容器中的液氮的残存量,定期填充。