一、原理
液氮超低温保藏方法是将菌种保藏在-196℃的液态氮中，或保藏在-150℃的气态氮中。原理是微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止，因而得以长期有效的保藏；微生物菌种在-80℃的低温保存，是依据低温条件可以减缓微生物的新陈代谢，以达到长期有效地保藏微生物的目的。
二、方法
1.冻存管的准备 使用螺旋口的塑料冻存管，用蒸馏水浸泡，冲洗干净，干燥后在121℃高压灭菌15-20min或160℃烘箱中干热灭菌2h，备用。
2.保护剂的选择 根据微生物的种类选择保护剂，一般采用10%-20%的甘油。
3.菌种的准备 一般采用保藏对数生长期中期或后期的培养物。
4.分装，预冻及保藏 将菌液分装完后，拧紧冻存管螺帽，在管外用非水溶性记号笔标记菌种编号及保藏日期。预冻时控制温度下降速度为每分钟下降1℃，下降到-35℃左右放入液氮罐中保藏，保藏周期可达10年以上。
三、注意事项
1．防止操作人被冻伤，注意安全，戴手套及面罩
2．塑料冻存管一定要拧紧螺帽，防止液氮渗入管中，如果液氮渗入管中，取出时液氮体积膨胀会发生爆炸，要特别小心。
3．注意观察液氮容器中的液氮的残存量，定期填充。
